Встраивание фрагмента ДНК между двумя сильными однонаправленными промоторами рекомбинантного нитевидного фага mp8t₀/rpoB увеличивает его стабильность и делает возможной противоположную ориентацию в нем клонируемого гена rpoB E. coli

Abstract

В полилинкерную область нитевидного фага М13 mp8 встроен фрагмент ДНК фага λ, включающий терминатор транскрипции t₀ и концевую часть гена oop-РНК. Полученный фаг использован для клонирования BglII-фрагмента космиды pJС703, содержащего гены Е. coli rpIJ, rpIL и rpoВ с промоторами Рj и Рb. Показано, что стабильность полученных в результате этого рекомбинантных фагов mр8t₀/rроВ повысилась до 93 % и стала возможной противоположная ранее наблюдаемой ориентация клонированного BglII-фрагмента.У полілінкерну область ниткоподібного фага М13 mp8 вбудовано фрагмент ДНК фага λ, що включає термінатор транскрипції t₀ і кінцеву частину гена oop-РНК. Отриманий фаг використано для клонування BglII-фрагмента косміди pJС703, що містить гени Е. coli rpIJ, rpIL і rpoВ з промоторами Рj і Рb. Показано, що стабільність отриманих в результаті цього рекомбінантних фагів mр8t₀/rроВ підвищилася до 93 % і стала можливою протилежна раніше спостережуваній орієнтація клонованого BglII-фрагмента.A fragment of λ phage DNA containing terminator of transcription (t₀) and terminal part of the oop-RNA gene was inserted into the polylinker area of M13 mp8 filamentous phage. The obtained phage was used to clone a BglII fragment of pJC703 cosmid, containing E. coli genes rpIJ, rpIL and rpoB together with promoters Pj and Pb. Stability of the obtained mp8t₀/rpoB recombinant phages increased up to 93 % and an orientation of the cloned BglII-fragment opposite to the previously observed one became possible.