Фагозависимый суперсинтез β-галактозидазы Escherichia coli и разработка способа ее очистки

Abstract

Разработан способ получения фермента β-галактозидазы (ЕС 3.2.1.23) в клетках Е. coli с использованием бактериофага. Выход фермента составлял 700 ед. активности в 1 мл культуральной среды. Накопление фермента в культуральной среде позволило использовать для предварительной очистки β-галактозидазы мембранную технику. Сконцентрированный и частично очищенный препарат β-галактозидазы доочищали методом лиганд-аффинной хроматографии. Конечный препарат β-галактозидазы характеризовался высокой степенью очистки и нативности. Процессы получения и очистки фермента β -галактозидазы были выполнены в опытно-промышленном варианте.Розроблено спосіб одержання ферменту β-галактозидази (ЕС 3.2.1.23) у клітинах Е. coli з використанням бактеріофага. Вихід ферменту складав 700 од. активності в 1 мл культурального середовища. Накопичення ферменту в культуральному середовищі дозволило використати для попередньої очистки β-галактозидази мембранну техніку. Сконцентрований та частково очищений препарат β-галактозидази доочищували методом ліганд-афінної хроматографії. Кінцевий препарат β-галактозидази характеризувався високим ступенем очистки і нативності. Процеси отримання і очистки ферменту β -галактозидазиThe phagedependent method of obtaining of β-galactosidase (EC 3.2.1.23) E. coli has been worked out. The yield was up 700 U of enzyme activity per ml of cultural fluid. Accumulation of enzyme in cultural medium has permitted to use membrane method for preliminary purification of β-galactosidase. Concentrated and partially purified preparation of β-galactosidase has been purified by ligand-affinity chromatography. Pure preparation of β-galactosidase has characterized by high purity and nativeness. The process of obtaining and purification of β-galactosidase were made in pilot scale.