Хлоропластная ДНК-топоизомераза I типа из листьев гороха

Abstract

Из полученных на ступенчатом градиенте изоосмотического перколла хлоропластов из листьев гороха выделена фракционированием в двухфазной системе сульфат аммония I полиэтиленгликоль-6000 с дальнейшей очисткой хроматографией на колонках хлоропластная ДНК-топоизомераза. Зависимость релаксирующей активности фермента от ионов Mg²⁺, блокирование ее бромистым этидием, отсутствие стимуляции релаксирующей активности полиаминами: спермидином, спермином, кадаверином, а также характер распределения топоизомеров в геле позволяют охарактеризовать топоизомеразу как прокариотическую I типа. Исследовано действие различных кофакторов на релаксирующую активность фермента.Із одержаних на ступінчатому градієнті ізоосмотичного перколу хлоропластів листя гроху виділена фракціюванням у двофазній системі сульфат амонію/поліетиленгліколь6000 с наступним очищенням хроматографією на колонках хлоропластна (хл) ДНК- топоізомераза. Залежність релаксуючої активності фермента від іонів Mg²⁺ , блокування її бромистим етидієм, відсутність стимуляції релаксуючої активності поліамінами: спермідином, сперміном, кадаверином, а також характер розподілу топоізомерів у гелі дозволяють визнати топоізомеразу як прокаріотичну І типу. Досліджено дію різних кофакторів па релаксуючу активність фермента.Chloroplasts of pea leaves were isolated by step gradient isoosmotic percoll, chloroplast DNA-topoisomerase. was isolated from them by fractionation in two-phase system ammonium sulfate/polyethylenglycol-6000 with the following purification by using column chromatography. The some properties of DNA-topoisomerase was searched. The dependence of relax activity of the enzyme from Mg²⁺ ions, its blocking by ethydium bromide, the absence of relax activity stimulation by polyamines: spermidine, spermin, cadaverine and the character of distribution of the topoisomers in the gels allow us to characterise the topoisomerase as prokaryotic type I.