Влияние терминальной модификации олигонуклеотидов на их стабильность в клетках микоплазм

Abstract

в культуральной среде и в клетках микоплазм Acholeplasma laidlawii PG-8 и Mycoplasma carpicolum California Kid. Показано, что в среде с 10 % сыворотки лошади все производные стабильны в течение 24 ч. В среде с микоплазмами, а также внутри клеток все незащищенные с 5'-конца олигонуклеотиды быстро разрушаются до мононуклеотидов и дефосфорилируются. В клетках образовавшийся фосфат реутилизируется. Феназиниевая или холестериновая группировки на 3'-конце олигонуклеотидов способствуют их стабильности. Производные гетерогенных олигонуклеотидов разрушаются быстрее, чем олиготимидилаты. Модификация олигонуклеотидов по 5' -концу путем образования 5' -фосфамидов препятствует их дефосфорилированию и замедляет деградацию олигонуклеотидов. Последние, защищенные с 3'- и 5'-концов, являются наиболее стабильными по отношению к действию нуклеаз микоплазм. Введение.Досліджено вплив модифікації 5'- і З'-кінцевих ланок дезоксирибонуклеотидів на їх стабільність в культуральному середовищі та клітинах мікоплазм Acholeplasma Iaidlawii PG-8 і Mycoplasma capricolum California Kid. Показано, що в середовищі з 10 % сироватки коня всі похідні стабільні на протязі 24 год. В середовищі з мікоплазмами, а також всередині клітин всі незахищені з 5'-кінця олігонуклеотиди швидко руйнуються до мононуклеотидів і дефосфорилюються. В клітинах утворений фосфат реутилізується. Феназінієва або холестеринова групи на З'-кінці олігонуклеотидів перешкоджають його руйнуванню. Похідні від гетерогенних олігонуклеотидів руйнуються швидше, ніж оліготиміділати. Модифікація олігонуклеотидів по 5'-кінцю шляхом утворення 5'-фосфамідів перешкоджає їх дефосфорилюванню та уповільнює деградацію олігонуклеотидів. Останні, захищені з 3'- та 5'-кінців, є найбільш стабільними по відношенню до дії нуклеаз мікоплазм.The effect of modification of terminal groups of deoxyribooligonucleotides on their stability in culture medium and mycoplasma cells A. laldlawii PQ-8 and M. capricolum California kid has been investigated. The oligonucleotides and their derivatives were stable in culture medium with 10 % horse serum during 24 hours. In the medium with mycoplasms, orthophosphates were rapidly removed from the 5'-ends and the oligonucleotides degraded to mononucleotides. In the cells, the scission of 5'-phosphomono-ester bonds was accompanied by reutilization of the phosphate. Attachment of the cholesterol or phenazinium residues to oligonucleotides 3'- or 5'-ends protected them from nucleases. The modification of oligonucleotides 5'-ends by 5'-phosphoramides formation, protect the oligonucleotides from dephosphorylation and slower the degradation down. Oligonucleotides protected from 3'- or 5'-ends are more stable to mycoplasma nucleases.