Іммобілізовані одноланцюгові антитіла для афінного очищення рекомбінантного інтерферону α2b людини

Abstract

Представлено лабораторний метод отримання афінного імуносорбенту для хроматографічного очищення білків, який полягає в орієнтованій і нековалентній іммобілізації рекомбінантних фрагментів антитіл на целюлозному носії. На основі ДНК-послідовностей одноланцюгових антитіл (ScFv) до інтерферону IFN-α2b людини і целюлозозв'язувального домену (CBD) із целюлозолітичного комплексу Clostridium thermocellum сконструйовано злитий білок (ScFv-CBD). Після експресії гена ScFv-CBD в Escherichia coli і виділення цільового білка у функціонально активній формі здійснено його пряму іммобілізацію на мікрогранулярній целюлозі Целюлозу з іммобілізованим ScFv-CBD використано як афінний сорбент для очищення рекомбінантного IFN-α2b людини.A laboratory method for obtaining immunoaffine media for chromatographic purification of proteins based on orienting and non-covalent immobilization of recombinant antibody fragments on cellulose matrix is described. The single-chain antibody (ScFv) against human IFN-α2b was genetically fused to cellulose-binding domain (CBD) from cellulosome complex of Clostridium thermocellum and expressed in Escherichia coli. After the isolation of the target protein in functionally active form from bacteria cells the directed immobilization on microgranular cellulose has been carried out. The cellulose with immobilized ScFv-CBD-fusion was used as affinity medium to perform the purifications of recombinant human IFN-α2bПредставлен лабораторный метод получения иммуноаффинного сорбента для хроматографической очистки белков, осно­ванный на ориентированной и нековалентной иммобилизации рекомбинантных фрагментов антител на целлюлозном носи­теле. На основе ДНК-последовательностей однонитчатых антител (ScFv) к IFN-α2b человека и связывающего целлюлозу домена (CBD) из целлюлозолитического комплекса Clostridium thermocellum сконструирован слитый белок (ScFv-CBD). После экспрессии ScFv-CBD в клетках Escherichia coli и выделения целевого белка в функционально активной форме проведена его прямая иммобилизация на микрогранулированной целлюлозе. Целлюлоза с иммобилизованным ScFv-CBD использована как аффинный сорбент для очистки рекомбинантного IFN-α2b человека.