Аналіз білок-білкових взаємодій, опосередкованих адаптерним білком Grb2, у процесі мегакаріоцитної диференціації клітин еритролейкемії людини лінії К562

Abstract

Вивчали білок-білкові взаємодії, опосередковані адаптерним білком Grb2, у процесі РМА-інду­кованої мегакаріоиитної диференціації клітин еритролейкемії людини лінії К562. Аналіз зв'язування здійснювали in vitro з використанням рекомбінаційних форм Grb2 повнорозмірної форми Grb2 та його N- і С-кінцевих SH3 доменів), конюгованих з глутатіон -S- трансферазою. Іденти­фіковано білки, зв'язування яких модулюється в клітинах, що диференціюються, та про­аналізовано динаміку їхнього зв'язування. Припускаємо, що ряд мішеней Grb2 може використову­ватися спільно в сигнальних шляхах, залучених як до стимуляції мітогенезу, так і до індукції диференціації лейкемічних клітин К562.Изучали белок-белковые взаимодействия, опосредованные адапторным белком Grb2, в процессе РМА-индуцированной мегака­риоцитной дифференцировки клеток эритролейкемии человека линии К562. Связывание анализировали in vitro с использовани­ем рекомбинантных форм Grb2 (полноразмерной формы Grb2 и его N- и С-концевых SH3 доменов), конъюгированных с глутатион-S-трансферазой. Идентифицированы белки, связы­ вание которых модулируется в дифференцирующихся клетках, и проанализирована динамика их связывания. Предполагается, что ряд мишеней Grb2 являются общими в сигнальных путях, вовлеченных как в стимуляцию митогенеза, так и в индукцию дифференцировки в лейкемических клетках К562.Protein-protein interactions mediated by adaptor protein Grb2 during the course of PMA-induced megakaryocytic differentiation of the human erythroleukemia cell line H562 were studied. Binding assay was performed in vitro using the recombinant forms of Grb2, (Crb2/full, Grb2/N-SH3 and Grb2/C-SH3), conjugated with glutathione-S-transferase. Proteins, binding of which are modulated in differentiated cells, were identified and binding dynamics was analysed. It is supposed that a set of Grb2 targets could be used in common in signalling pathways involved in both the stimulation of mitogenesis and the induction of differentiation in the K562 cells.