Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro

Abstract

Цель работы — определить влияние рекомбинантного цитокина EMAP II (эндотелиальный и моноцитактивирующий полипептид II) на уровень экспрессии гена MGMT, кодирующего репаративный энзим О⁶­метилгуанин­ДНК метилтрансферазу (MGMT), в культурах клеток человека. Исследование влияния EMAP II на пролиферацию клеток проводили с использованием стандартного МТТ­теста. Белок MGMT в клеточном экстракте идентифицировали с помощью Вестерн­блот анализа. Использовались клеточные линии: А102 (фибробласты), ПК­1 (стромальные клетки пуповинной крови) и 4BL6 (клетки, полученные из периферической крови). В серии экспериментов показано, что цитокин EMAP II вызывает индукцию экспрессии MGMT в клетках человека исследованных линий. При высоких концентрациях этого цитокина наблюдалось снижение количества клеток. Установлено, что присутствие цитокина EMAP II в бессывороточной культуральной среде приводит к возрастанию уровня экспрессии репаративного энзима MGMT в клетках человека in vitro.Мета роботи – визначити вплив рекомбінантного цитокіну EMAP II (ендотеліальний та моноцитактивуючий поліпептид II) на рівень експресії гена MGMT, що кодує репаративний ензим О⁶-метилгуанін-ДНК метилтрансферазу (MGMT), в культурах клітин людини. Дослідження впливу EMAP II на виживання і проліферацію клітин проводили з використанням стандартного МТТ-тесту. Білок MGMT у клітинному екстракті ідентифікували за допомогою Вестерн-блот аналізу. Використовувались клітинні лінії: А102 (фібробласти), ПК-1 (стромальні клітини пуповинної крові) і 4BL6 (клітини, отримані з периферійної крові). В серії експериментів показано, що цитокін EMAP II спричиняє індукцію експресії MGMT в клітинах людини досліджуваних нами ліній. При високих концентраціях цього цитокіну спостерігалось зниження кількості клітин. Встановлено, що присутність цитокіну EMAP II в безсироватковому культуральному середовищі призводить до зростання рівня експресії репаративного ензиму MGMT в клітинах людини in vitro.The aim of our study was to investigate the effect of recombinant human cytokine EMAP II (endothelial monocyte-activating polypeptide II) on the expression of MGMT gene, encoding repair enzyme O⁶-methylguanineDNA methyltransferase (MGMT) in human cell cultures. The influence of EMAP II on cell proliferation was performed using routine MTT assay. Identification of MGMT in cell extracts was performed using Western blot analysis. We used cell lines: A102 (fibroblasts), CB-1 (umbilical cord blood stromal cells), 4BL6 (cells derived from peripheral blood). It was shown that cytokine EMAP II caused induction of MGMT expression in studied human cell lines. There was a decrease in cell number at high concentrations of this cytokine. It was found that the presence of cytokine EMAP II in serum-free growth medium leads to increasing of repair enzyme MGMT expression level in human cells in vitro.