Створення та характеристика імунної комбінаторної бібліотеки кДНК варіабельних генів імуноглобулінів миші

Abstract

Сконструйовано комбінаторну бібліотеку кДНК варіабельних генів імуноглобулінів мишей, імунізованих рекомбінантним інтерфероном β1b людини (rhIFN-β1b). Для цього ампліфіковану зі спленоцитів кДНК варіабельних генів важких (VH) і легких (VL) ланцюгів імуноглобулінів об’єднували лінкерною ДНК у складі послідовностей одноланцюгових антитіл – ScFv’s (single chain Fv antibodies). Одержаний пул ScFv-ДНК було клоновано у фагмідному векторі і використано для трансформації Escherichia coli. З використанням методу фагового дисплея відібрано бактеріальні клони, які продукують специфічні до rhIFN-β1b ScFv’s. У роботі встановлено такі характеристики створеної бібліотеки, як представленість, функціональний розмір та вихідне різноманіття послідовностей ScFv-ДНК. Продемонстровано високу специфічність взаємодії виділених фаговим дисплеєм ScFv’s з rhIFN-β1b.Была сконструирована комбинаторная библиотека кДНК вариабельных генов иммуноглобулинов мышей, иммунизированных рекомбинантным интерфероном β1b человека (rhIFN-β1b). Для этого амплифицированную из спленоцитов кДНК вариабельных генов тяжелых (VH) и легких (VL) цепей иммуноглобулинов объединяли линкерной ДНК в составе последовательностей одноцепочечных антител – ScFv’s (single-chain Fv-antibodies). Полученный пул ScFv-ДНК был заклонирован в фагемидный вектор и использован для трансформации клеток Escherichia coli. С использованием метода фагового дисплея отобраны бактериальные клоны, которые продуцируют специфические к rhIFN-β1b одноцепочечные антитела. В работе определены такие характеристики созданной библиотеки, как представленность, функциональный размер, а также исходное разнообразие последовательностей ScFv-ДНК. Продемонстрирована высокая специфичность взаимодействия ScFv, выделенных с помощью фагового дисплея, с rhIFN-β1b.A cDNA combinatorial antibody library of mouse variable immunoglobulin fragments has been constructed from mice immunized with rhIFN-β1b. For this purpose, cDNAS of immunoglobulin variable heavy (VH) and variable light (VL) chains genes amplified from splenocytes were joined with linker DNA to form ScFv’s (single-chain Fv-antibodies). The obtained ScFv-DNA pool was cloned into a phagemid vector and used for Escherichia coli transformation. Using the phage display technique, bacterial clones producing single-chain antibodies specific to rhIFN-β1b were selected. The following characteristics of the combinatorial library were determined in this work: abundance, functional size, and the initial ScFv-DNA diversity in the library constructed. High specificity of interaction between phage displayed ScFv’s and rhIFN-β1b has been demonstrated.