Бактериальная экспрессия полноразмерных и усеченных форм цитокина ЕМАР-2 и цитокинподобного домена тирозил-тРНК синтетазы млекопитающих

Abstract

В вектор для бактериальной экспрессии рЕТ32а клонированы и секвенированы вставки ДНК, кодирующие полноразмерные цитокин ЕМАР-2 и цитокинподобный домен тирозил-тРНК синте­тазы (TyrRS) млекопитающих, а также их делетированные с СООН- и NH₂-концов формы. Получена бактериальная экспрессия всех клонов, и для полноразмерных форм осуществлены аффинная очистка до гомогенного состояния, протеолитическое удаление константной части слитых рекомбинантных белков, а также тестирование их биологической активности в реакции индукции тканевого фактора. Полноразмерная форма цитокинподобного домена TyrRS не взаимо­действует с поликлональными антителами к ЕМАР-2 в вестерн-блот-анализе. Делается вывод о пригодности полученной панели рекомбинантных белков для сравнительного изучения локализации функционально важных участков белковУ вектор для бактеріальної експресії рЕТ32а клоновано і секвеновано вставки ДНК, що кодують повнорозмірні цитокін ЕМАР-2 і цитокінподібний домен тирозил-тРНК синтетазы (TyrRS) ссавців, а також їхні делетовані з СООН- і NH₂-кінців форми. Отримано бактеріальну експресію всіх клонів, та для повнорозмірних форм здійснено афінне очищення до гомогенного стану, протеолітичне видалення константної частини злитих рекомбінантних білків, а також тестування їхньої біологічної активності у реакції індукції тканинного фактора. Повнорозмірна форма цитокінподібного домену TyrRS не взаємодіє з поліклональними антитілами до ЕМАР-2 у вестерн-блот-аналізі. Зроблено висновок щодо придатності одержаної панелі рекомбінантньїх білків для порівняльного вивчення локалізації функціонально важливих ділянок білківDNA fragments encoded full-length cytokine EMAP-2 and cytokine-like domain of mammalian TyrRS and truncated from COOH- and NH₂-termini forms were cloned in vector for bacterial expression pET32a. For all clones bacterial overexpression were obtained and full-length forms were purified to homogeneity state by affin chromatography and affinity tag was remove by protease cleavage. Induction of tissue factor for full-length forms was tested. Full-length form of cytokine-like domain of mammalian TyrRS did not interact with polyclonal antibody against EMAP-2 in western-blot analysis. It was concluded that this set of recombinant proteins may be usefull for functional study of these cytokine proteins.