Клонирование, экспрессия и очистка тРНКPro из бактерии Enterococcus faecalis

Abstract

Цель. Разработать методику экспрессии и очистки транскрипта тРНКPro бактерии E. faecalis. Методы. Коэкспрессированную in vitro с цис-гидролитическим рибозимом тРНК очищали при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием анионообменной хроматографической колонки. Результаты. Получены удовлетворительные выход продукта и чистота препаратов. Транскрипт тРНКPro проявляет акцепторную активность в реакции аминоацилирования. Выводы. Разработанный метод может быть внедрен в лабораторную практику и стать основой для создания новых способов получения транскриптов других тРНК.Aim. To elaborate the method of expression and purification of bacteria Enterococcus faecalis tRNAPro transcript. Methods. tRNA, co-expressed in vitro with cis-hydrolytical ribozyme, was purified by high performance liquid chromatography using anion-exchange chromatographic column. Results. A satisfactory yield of high purity preparation was obtained. A transcript of tRNAPro exhibits acceptor activity in aminoacylation reaction. Conclusions. The method developed may be introduced in laboratory practice including the obtaining of other tRNAs.Мета. Розробити методику експресії і очищення транскрипта тРНКPro бактерії E. faecalis. Методи. Коекспресовану in vitro з цис-гідролітичним рибозимом тРНК очищували за допомогою високоефективної рідинної хроматографії з використанням аніонообмінної колонки. Результати. Отримано задовільні вихід продукту та чистоту препаратів. Транскрипт тРНКPro виявляє акцепторну активність у реакції аміноацилювання. Висновки. Розроблений метод може бути впроваджений у лабораторну практику та стати основою для створення нових способів отримання транскриптів інших тРНК.