Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 3. Дозированная модификация двунитчатого зонда и достраивание гибридов

Abstract

Рассмотрены варианты получения окрашенного зонда с использованием металлокомплекса, включающего этаноламино-формальдегидные цепочки, образующие координационные связи с ионом серебра. Модификацию проводили на полностью денатурированной ДНК, частично расплетенных с помощью формальдегида молекулах, а также дуплексах зонд – матрица за счет разветвления уже сформированной структуры олигомерных цепочек. С использованием последнего варианта окраски при степени модификации зонда – 10% достигнутая чувствительность детектирования иммобилизованной на нитроцеллюлозных мембранах ДНК составила десятки пикограммов.Розглянуто варіанти отримання забарвленого зонда з використанням металокомплексу, який містить еталонаміно-формальдегідні ланцюжки, що утворюють координаційні зв'язки з іонами срібла. Модифікацію здійснювали на повністю денатурованій ДНК, частково розплетених за допомогою формальдегіду молекулах, а також дуплексах зонд – матриця за рахунок розгалуження уже сформованої структури олігомерних ланцюжків. Застосовуючи останній варіант забарвлення, при ступені денатурації = 10 % досягнута чутливість детектування іммобілізованої на нітроцелюлозних мембранах ДНК склала десятки пікограмів.The different ways of the coloured probe preparation with the use of the metal complex comprising ethanol-amine-formaldehyde chains forming coordination bonds with silver ions have been discussed. The denaturated DNA. partially unwind with formaldehyde molecules, and the probe-template duplexes have been modified on the basis of the branching of oligomer chains already formed. The sensitivity of the detection of 10 % -modified Off A immobilized on nitrocellulose filters has reached dozens of picogramms.