Дослідження структурно-функціональних властивостей імуногенного фрагмента Кі-67 антигену та отримання до нього полі- і моноклональних антитіл

Abstract

Дослідження особливостей функціонування асоційованих з пухлиною антигенів дає змогу розшири­ти уявлення щодо молекулярних механізмів онкогенезу. Раніше нами ідентифіковано ядерний білок Kі-67 як один із автоантигенів меланоми людини, а кДНК імуногенного фрагмента Kі-67 антигену клоновано в рЕТ23d вектор та експресовано у клітинах бактерій. В представленій роботі рекомбінантний пептид Kі-67, очищений з лізатів клітин бактерій, використано як антиген для отримання полі- і моноклональних антитіл Одержані антитіла застосовано для визначення локалізації Kі-67 антигену в клітинах аденокарциноми молочної залози. Методом імунодот-блот-аналізу встановлено, що одержаному рекомбінантному фрагменту Kі-67 антигену розміром 18 кДа притаманні ДНК-зв'язувальні властивості.Исследование особенностей функционирования ассоциирован­ных с опухолью антигенов дает возможность расширить представления о молекулярных механизмах онкогенеза. Ранее нами идентифицирован ядерный белок Kі-67 как один из аутоантигенов меланомы человека, а к ДНК иммуногенного фрагмента Kі-67 антигена клонирована в pET23d вектор и экспрессирована в клетках бактерий. В представленной рабо­те рекомбинантный пептид Ki-67, очищенный из лизатов клеток бактерий, использован как антиген для получения поли- и моноклональных антител. Выделенные антитела при­менены для определения локализации Ki-67 антигена в клет­ках аденокарциноми молочной железы Методом иммунодотблот-анализа установлено, что полученный рекомбинантный фрагмент Kі-67 антигена размером 18 кДа обладает ДНК-связывающими свойствами.The study of tumor-associated antigens function is a prerequisite for understanding the molecular mechanisms of oncogenesis. Earlier we have determined the nuclear protein Ki-67 as an autoantigen in human melanoma. cDNA of immunogenic fragment of Ki-67 has been cloned into pET23d vector and expressed in bacterial cells. The recombinant fragment of Ki-67 has been purified from the bacterial cell lysate has been used as an antigen for the production of polyclonal and monoclonal antibodies with following detection of Ki-67 in Breast adenocarcinomas. We have shown by the immunodot-blot analysis that the 18 kDa recombinant fragment of Ki-67 possesses a DNA-binding activity.