Ідентифікація ендогенних ізоформ кінази рибосомного білка S6 – S6K2

Abstract

До родини кіназ рибосомного білка S6 належать два представники — S6K1 і S6K2. Перший функціонує в клітині у вигляді двох ізоформ — цитоплазматичної (S6KI/II, 70 кДа) і ядерної (S6K1/I, 85 кДа), яка містить сигнал ядерної локалізації в межах N-кінцевого подовження. Вважається, що ізоформи S6K1 виникають як результат альтернативного сплайсингу мРНК або ж використання альтернативних стартів трансляції мРНК. Відомо, що S6KІ/II залучена до регуляції біогенезу рибосом через контроль трансляції мРНК рибосомних білків. Функцію S6K1/1 на сьогодні не досліджено. Високий рівень структурної гомологи S6K1 і S6K2 і присутність двох альтернативних стартів трансляції мРНК свідчать про те, що S6K2 (як і S6K1) може існувати у вигляді двох ізоформ. Вестерн-блот-аналізом лізатів клітин з використанням поліклональних антитіл проти S6K2 не виявлено S6K2/I ізоформи очікуваної молекулярної маси (-70 кДа). Натомість за допомогою анти-S6K2 антитіл детектовано як S6K2/II, так і білковий продукт розміром 105 кДа.Семейство киназ рибосомного белка S6 включает двух пред­ставителей – S6K1 и S6K2. Первый функционирует в клетке в виде двух изоформ – цитоплазматической (S6K1/II, 70 кДа) и ядерной (S6K1/I, 85 кДа), содержащей сигнал ядерной локализации в рамках N-концевого удлинения. Счита­ется, что S6K1 изоформы возникают в результате альтернативного сплайсинга мРНК или же использования альтерна­тивных стартов трансляции. S6K1/II участвует в регуляции биогенеза рибосом, контролируя трансляцию мРНК рибосомных белков. Функции S6K1/I на сегодня не изучены. Высокий уровень структурной гомологии S6KI и S6K2 свидетельству­ет о том, что S6K2 (аналогично S6K1) существует в виде двух изоформ. Вестерн-блот-анализом лизатов клеток и гомогенатов тканей с использованием поликлональных антител против S6K2 не выявлена S6K2/I форма с ожидаемой молекулярной массой (-70 кДа). Однако с помощью анти-S6K анти­тел детектирован белковый продукт размером 105 кДа.S6K1 and S6K2 belong to the family of ribosomal protein S6 kinases. S6K1 has two isoforms - cytoplasmic (S6K1/II, 70 kDa) and nuclear (S6K1/I, 85 kDa) possessing nuclear localization signal within the N-terminal extension region. It is believed that S6K1 isoforms are generated from a single gene by alternative mRNA splicing or the use of alternative translational start sites. S6K1/II is implicated in ribosomal biogenesis via regulation of ribosomal proteins mRNAs translation. The function of S6K1/I is not clear. The high level of structural homology between S6K1 and S6K2 suggest that S6K2 has two isoforms as well, but Western blot analysis of cell lysates and tissue homogenates does not reveal S6K2/1 with expecting molecular mass (~70 kDa). However, 105 kDa protein has been detected by anti-S6K2 polyclonal antibodies.