Отримання рекомбінантного дефензину 1 сосни звичайної та його антифунгальна активність

Abstract

Нещодавно нами очищено ендогенний дефензин із проростків сосни звичайної, а також клоновано кДНК, яка кодує дефензин 1 (PsDef1, Pinus sylvestris дефензин 1). Фрагмент кДНК дефензину 1, який кодує зрілу форму цього білка, клоновано у вектор pET42а(+) та індуковано його експресію у бактеріальній системі Escherichia coli. Оптимізовано умови продукування рекомбінантного білка PsDef1, злитого з глутатіон-S-трансферазою, у розчинній формі. Після афінного очищення цього білка на глутатіон-сефарозі та протеолізу фактором Ха отримано біологічно активний препарат рекомбінантного PsDef1, антифунгальна активність якого співмірна з такою ендогенного дефензину 1 сосни звичайної.

Recently we have purified an endogenous defensin from Scots pine germs, and cloned cDNA encoding defensin 1 (PsDef1, Pinus sylvestris defensin 1). The cDNA region encoding a mature form of Scots pine defensin 1 was cloned into a vector pET 42a(+), and the expression of recombinant GST/PsDef1 in the Escherichia coli bacterial system was induced. The conditions of production of soluble GST-proteins were optimized. After purification of the recombinant protein by affinity chromatography on Glutathione-Sepharose column and proteolytic cleavage with Factor Xa, the functionally active preparation of recombinant PsDef1 was obtained. Its antifungal activity is similar to that of endogenous Scots pine defensin 1.

Ранее нами очищен эндогенный дефензин из проростков сосны обыкновенной, а также клонирована кДНК, кодирующая дефензин 1 (PsDef1, Pinus sylvestris дефензин 1). Фрагмент кДНК дефензина 1, кодирующий зрелую форму этого белка, клонирован в вектор pET42а(+) и индуцирована его экспрессия в бактериальной системе Escherichia coli. Оптимизированы условия продукции рекомбинантного белка PsDef1, слитого с глутатион-S-трансферазой, в растворимой форме. После аффинной очистки этого белка на глутатион-сефарозе и протеолиза фактором Ха получен биологически активный препарат рекомбинантного PsDef1, антифунгальная активность которого соизмерима з таковой эндогенного дефензина 1 сосны обыкновенной.