Kлонування та аналіз кДНК дефензину 1 сосни звичайної

Abstract

Антифунгальний білок з молекулярною масою 5,6 кДа очищено з коренів семиденних проростків сосни звичайної. Мас-спектрометричним аналізом показано його приналежність до рослинних дефензинів. кДНК дефензину 1 сосни (PsDef1) довжиною 252 п. н. отримано методом ПЛР-ампліфікіції з кДНК бібліотеки Pinus sylvestris L. та клоновано у вектор рЕТ 23d(+). PsDef1 кДНК кодує білок з 83 амінокислотних залишків (а. з.), який містить N-кінцевий сигнальний пептид з 33 а. з. Зріла форма білка вирізняється наявністю специфічних консервативних залишків, властивих усім рослинним дефензинам. Показано структурну та функціональну подібність між PsDef1 та дефензинами групи І.

Antifungal protein with a molecular weight 5.6 kDa was purified from 7-days old Scots pine seedlings. LC-MS/MS analysis revealed this protein to belong to plant defensins. A pine defensin 1 cDNA (PsDef1), 252 b. p. long, was obtained by PCR amplification from Pinus sylvestris L. cDNA library and was cloned into vector pET 23d(+). PsDef1 cDNA encodes 83-amino acid protein with 33-amino acid N-terminal signal peptide. The mature protein is characterized by the presence of specific conserved residues common to all plant defensins. Structural and functional similarity between PsDef1 and defensins of group 1 has been shown.

Антифунгальный белок с молекулярной массой 5,6 кДа очищен из корней семидневных проростков сосны обыкновенной. Масс-спектрометрическим анализом показана його принадлежность к растительным дефензинам. кДНК дефензина 1 сосны (PsDef1) длиной 252 п. н. получена методом ПЦР-амплификации из кДНК библиотеки Pinus sylvestris L. и клонирована в вектор рЕТ23d(+). PsDef1 кДНК кодирует белок из 83 аминокислотных остатков (а. о.) с N-концевым сигнальным пептидом из 33 а. о. Для зрелой формы характерно наличие специфических консервативных остатков, свойственных всем растительным дефензинам. Показано структурное и функциональное сходство между PsDef1 и дефензинами группы І.