Активація апоптозу антагоністами тіаміну в астроцитах щурів

Abstract

Представлено результати експериментів з дослідження in vitro реакції астроцитів щурів (клітини DITNC) на додавання до середовища інкубації відомих антагоністів тіаміну (вітаміну В1). Використано такі антагоністи тіаміну: ампроліум, піритіамін та окситіамін. Результати дослідження на основі конфокальної лазерної сканувальної флуоресцентної мікроскопії показали, що інкубація клітин протягом 72 год з окситіаміном або піритіаміном призводить до вакуолізації клітинної мембрани, переміщення внутріиіньомембранних фосфоліпідів на зовнішню поверхню мембрани та транслокації розщепленої каспази З до клітинного ядра. Методами імунофлуоресценції та Вестерн-блот-аналізу виявлено розщеплення каспази З в клітинах, інкубованих з піритіаміном та окситіаміном у концентраціях 100 мкМ. Ці дані підтверджують той факт, що інкубація клітин DITNC з піритіаміном та окситіаміном активує процеси апоптозу. За тих самих умов ампроліум не впливав значно на клітини DITNC.

The experimental results of in vitro investigation of rat astrocytes (DITNC cells) reaction to the addition of well-known thiamine (vitamin B1) antagonists into the incubation medium are represented in the work. The following antagonists of thiamine - amprolium, pyrithiamine, and oxythiamine were used. Confocal laser scanning fluorescent microscopy has revealed that 72 hours incubation of cells with oxythiamine or pyrithiamine results in cell membrane vacuolization, externalization of membrane phospholipids and translocation of cleaved caspase 3 to the nucleus. Cleavage of caspase 3 in the cells that incubated with 100 µM concentration of oxythiamine and pyrithiamine was determined by Western blot and imunofluorescence methods. These data prove that incubation of DITNC cells with oxythiamine and pyrithiamine caused the activation of apoptosis processes. At the same conditions amprolium did not influence DITNC cells significantly.

Представлены результаты экспериментов по исследованию in vitro реакции астроцитов крыс (клетки DITNC) на добавление в среду инкубации известных антагонистов тиамина (вита­мина В1). Использовали следующие антагонисты тиамина: ампролиум, пиритиамин и окситиамин. Результаты исследо­вания на основе конфокальной лазерной сканирующей флу­оресцентной микроскопии показали, что инкубация клеток на протяжении 72 ч с окситиамином или пиритиамином приво­дит к вакуолизации клеточной мембраны, переходу внутри-мембранных фосфолипидов на внешнюю поверхность мембра­ны и транслокации расщепленной каспазы 3 в клеточное ядро. Методами иммунофлуоресценции и Вестерн-блот-анализа вы­явлено расщепление каспазы 3 в клетках, инкубированных с пиритиамином и окситиамином в концентрациях 100 мкМ. Эти данные подтверждают тот факт, что инкубация DITNC клеток с пиритиамином и окситиамином активирует процес­сы апоптоза В тех же условиях ампролиум не влиял значи­тельно на клетки DITNC.