Сравнение эффективности использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии гена β-галактозидазы в Escherichia coli

Abstract

Создана модельная система, позволяющая сравнить эффективность использования раннего и позднего промоторов фага Т7 для экспрессии beta-галактозидазного гена Е. coli. Избрана следующая стратегия конструирования. Ген PHК-полимеразы фага Т7 клонирован в составе ДНК векторного фага lambda, Модельный ген z lас-оперона Е. coli (EcoRI-Sal1-фрагмент pLZ56) клонирован в составе ДНК коммерческой плазмиды GEM-I фирмы «Promega» (USA), содержащей поздний промотор фага Т7. В клонироанном фрагменте сохранены сайты связывания с рибосомами и промотор А3, ранний промотор фага Т7, специфичный для РНК-полимеразы Е. coli. Приведены закономерности синтеза β-галактозидазы при транскрипции z-гена как с позднего промотора фага Т7, так и с промотора А3.

Створено модельну систему, що дозволяє порівняти ефективність використання раннього і пізнього промоторів фага Т7 для експресії beta-галактозидазного гена Е. coli. Обрано наступну стратегію конструювання. Ген PHК-полімерази фага Т7 клоновано у складі ДНК векторного фага lambda, Модельний ген lасz-оперону Е. coli (EcoRI-Sal1-фрагмент pLZ56) клоновано у складі ДНК комерційної плазміди GEM-I фірми «Promega» (USA), що містить пізній промотор фага Т7. У клонованому фрагменті збережені сайти зв'язування з рибосомами і промотор А3, ранній промотор фага Т7, специфічний для РНК- полімерази Е. coli. Наведено закономірності синтезу β-галактозидази при транскрипції z-гена як з пізнього промотора фага Т7, так і з промотора А3.

The model system for comparison of the efficiency of use of early and late promoters of T7 phage for the β-galactosidase gene expression has been constructed. The following strategy of construction has been chosen. The gene of T7 phage RNA-polymerase has been inserted into DNA of phage cloning vector. The model gene z of lac operon of E. coli (EcoRI-Sall digest of pLZ56) has been inserted into DNA of plasmid GEM-1 (firm «Promega») which contains phage T7 late promoter. The cloned pLZ56 fragment of DNA contains also S-D sites and A3 promoter specifically recognized by E. coli RNA-polymerase. Some features of b-galactosidase synthesis during transcription of the z gene under the control of the late promoter of phage T7 and under the control of A3 promoter are shown.