Получение и очистка β-лактamазы TEM-I Escherichia coli

Abstract

Разработана система суперсинтеза фермента β-лактамазы в клетках Е. coli по фагозависамой технологии. Это позволило получить фермент в количестве (1—2)·10⁶ ед. активности в 1 мл культуральной жидкости. Предложен метод препаративного выделения β-лактамазы, значительно упрошенный по сравнению с известными ранее. Выход препарата составляет 45 % исходного количества фермента в культуральной жидкости. Препарат форетически гомогенен и для использования в иммуноферментном анализе в дальнейшей очистке не нуждается.Розроблено систему суперсинтезу ферменту β-лактамази в клітинах Е. coli за фагозалежною технологією. Це дозволило отримати фермент у кількості (1–2) · 10⁶ од. активності в 1 мл культуральної рідини. Запропоновано метод препаративного виділення β-лактамази, значно спрощений у порівнянні з відомими раніше. Вихід препарату становить 45 % початкової кількості ферменту у культуральній рідині. Препарат форетично гомогенний і для використання в імуноферментному аналізі подальшого очищення не потребує.The phage-technology for supersynthesis of β-lactamase TEM-1 in E. coli cells has been worked out. It has permited obtaining (1–2) ·10⁶ units of enzyme activity per ml of cultural fluid. The method for wide-scale β-lactamase preparation is suggested, that is much simplier as against those known before. The enzyme recovery is about 45 %. Our preparation is electrophoretically homogenous and may be used in immuno-enzyme assay without further purification.