Отримання цибридних транспластомних рослин Brassica Napus з хлоропластами Lesquerella fendleri

Abstract

Проводили перенос трансформированных пластид Lesquerella fendleri в растения Brassica napus методом соматической гибридизации. В экспериментах были использованы транспластомные растения L. fendleri, которые содержали в пластидной ДНК селективный маркерный ген aadA16gfp, обусловливающий устойчивость к спектиномицину/стрептомицину и зеленую флюоресценцию в ультрафиолетовых лучах. Протопласты хлорофиллдефектных растений B. napus сливали с γ-облученными протопластами транспластомных растений L. fendleri. Зеленые колонии, которые росли на селективной среде, содержащей спектиномицин и стрептомицин, отбирали как гибридные. Среди 59 гибридных колоний в двух наблюдали регенерацию побегов. Морфологически нормальные растения были получены для одной линии. Молекулярно-биологический анализ растений показал, что они являются транспластомными цибридами, которые имеют ядерный геном B. napus и трансформированный пластом L. fendleri.

Transferring of Lesquerella fendleri genetically transformed plastids to Brassica napus plants has been performed with the somatic hybridization method. The plastome of the previously engineered transplastomic L. fendleri plants contained the aadA16gfp selective marker gene conferring spectinomycin/streptomycin resistance and green fluorescence under UV light. The protoplasts of B. napus chlorophyll-deficient plants were fused with γ-irradiated protoplasts of L. fendleri transplastomic plants. A total of 59 green hybrid colonies have been isolated followed by spectinomycin/streptomycin selection. Shoot regeneration has been observed for two cell lines. Morphologically normal plants have been regenerated for one of them. PCR and isozyme analyses showed that the plants were transplastomic cybrids containing B. napus nuclei and L. fendleri transformed chloroplasts.