RecA-подобные белки в ядрах клеток высших: выявление коровых структур пахитенных хромосом в изолированных нефиксированных бычьих мейотических ядрах с помощью антител к белку RecA ИЗ Escherichia coli

Abstract

Поливалентные антитела к белку RecA из Е. coli (анти-RecA) специфически взаимодействуют с полипептидами с молекулярными массами 40 000 и 90 000 из пахитенных ядер клеток семенников быка. Как показано методом непрямой иммунофлюоресценции, анти-RecA на нефиксированных препаратах этих ядер выявляют равномерно окрашенные коровые структуры мейотических хромосом с ярко окрашенными узлами (иногда теломерной локализации) в окружении ДНК, прокрашенной йодистым пропидием. Эта картина предполагает связывание анти-RecA с компонентами синаптонемального комплекса, четко выраженное в поздних ре комбинационных узлах в ходе образования хиазм. В соматических клетках анти-RecA окрашивают ядро слабее и диффузно, а в сперматозоидах антиген выявляется, как правило, в спинной и акросомальной части головки. Предварительная обработка препаратов ядер тритоном X-100 и 2 M NaCl несколько снижает интенсивность свечения, но сохраняет коровые структуры, тогда как обработка ДНКазой I с последующей экстракцией 2 M NaCl вызывает заметную диссоциацию антигена.

Полівалентні антитіла до білка RecA із E coli (анти-RecA) специфічно взаємодіють з поліпептидами, що мають молекулярну масу 40 000 і 90 000, із пахітенних ядер клітин сім'янників бика. Як показано методом непрямої імунофлюоресценції, анти-RecA на нефіксованих препаратах цих ядер виявляють рівномірно зафарбовані корові структури мейотичних хромосом із яскраво зафарбованими вузлами (іноді тіломірної локалізації) в оточенні ДНК, що пофарбована йодистим пропідієм. Ця картина передбачає зв'язування анти-RecA з компонентами сінаптонемального комплексу, яке чітко виражене в пізніх рекомбінаційних вузлах при утворенні хіазм. У передмейотичних клітинах aнти-RесА фарбують ядро слабше і дифузно, а в сперматозоїдах антиген виявляється, як правило, в спинній та акросомальній частині голівки. Попередня обробка препаратів ядер тритоном Х-100 і 2 M NaCl трохи знижує інтенсивність свічення, але зберігає корові структури, тоді як обробка ДНКазою І з подальшою екстракцією 2 M NaCl викликає помітну дисоціацію антигену.

Polyvalent antibodies to RecA protein of E. coli (anti-RecA) interect specifically with 40-and 90-kDa polypeptides from pachylene nuclei of bull testes. As it was shown by the indirect immunofluorescence technique, using of the anti-RecA in unfixed isolated nuclei at different mciotic stags revealed the uniform staining of fin ineiotic chromosome cores with bright staining dots (sometimes of telomeric localization) surrounded by DNA counterstaing with propidium iodide. This picture suggests binding of anii-RecA with components of synaptonemal complexes that is expressed more brightly in the recombination nodules during chiasma formation. The staining by anti-RecA was more feeble and difiusible in premeiotic cells. In spermatozoa antigenes are revealed in the dorsal or acrosome-like material of their heads.