Получение ингибиторов трипсиноподобных протеиназ из отходов гамма-глобулинового производства

Abstract

Целью исследований было выделение и очистка ингибиторов трипсиноподибних протеиназ из промышленных отходов получения гамма-глобулина из донорской крови человека. В работе использовали отходы I-й стадии получения гамма-глобулина из донорской крови человека и биохимические методы исследования. В результате исследований разработаны новая методика выделения и очистки ингибитора трипсиноподибних протеиназ с использованием гель-фильтрации на сефадексе и аффинной хроматографии на трипсин-сефарозе 4В. Использование для аффинной хроматографии на сефарозе 4В трипсина в качестве лиганда позволило очистить ингибитор трипсиноподобных протеиназ от 157,47 до 282,95 раз по сравнению с исходным белком. Из отходов материала через 24 часа (I-й стадия) получения гамма-глобулина установлена активность ингибитора трипсиноподобных протеиназ во втором белковом пике (фракции № 48-58), которые элюировались 0,1 М CH3COOH (рН 3,1) с максимальной активностью ингибитора во фракции № 49 (88,6 ± 8,3 мг/мл в 1 мин.) с процентом выхода 24,89%.

Метою досліджень було виділення та очистка інгібіторів трипсиноподібних протеїназ із промислових відходів отримання гамма-глобулину з донорської крові людини. У роботі використовуваливідходи I-ї стадії отримання гамма-глобулину з донорської крові людини та біохімічні методи дослідження. У результаті досліджень розроблено нова методика виділення і очистки інгібітору трипсиноподібних протеїназ з використанням гель – фільтрації на сефадексах та аффінної хроматографії на трипсин-сефарозі 4В. Використання для аффінної хроматографії на сефарозі 4В трипсину в якості ліганда дозволило очистити інгібітор трипсиноподібних протеїназ від 157,47 до 282,95 разів у порівнянні з вихідним білком. З відходів матеріалу через 24 год. (I-й стадії) отримання гамма-глобуліну встановлена активність інгібітору трипсиноподібних протеїназ у другому білковому пиці (фракції № 48-58), який элюювався 0,1 М CH3COOH (рН 3,1) з максимальною активністю інгібітору во фракції № 49 (88,6 ± 8,3 мг/мл за 1 хв.) та відсотком виходу 24,89 %.

Objective – to extract and purify inhibitors of trypsine-like proteinases. From industrial wastes of gamma-globuline manufacturing from a human blood. In the work we have usedoutcomes of the I-st stage of gamma-globuline. Manufacturing from a human donor blood and biochemical methods of investigation. The research resulted in new technique of extraction and purification. of trypsine-like proteinases inhibitor with the use of gel-filtration on sefadexes and affine chromatography on trypsine-sepharosis 4В. The use of trypsine as lygand for affine chromatography on sepharosis 4В allowed to purify inhibitor from 157,47 to 282,95 times if compared with ourcoming lipid. From the outcomes of the material in 24 h (I-st stage) of gammaglobuline manufacturing the activity of inhibitor of trypsine-like proteinases have been determined in the second lipid peak (fractions № 48-58). It was eluated with 0,1 М CH3COOH (рН 3,1) with top activity inhibitor in fraction in fraction № 49 (88,6 ± 8,3 mg/ml per 1 min.) and total outcome of 24,89 %.