Нейропептид кіоторфін запобігає розвитку апоптозу фібробластів лінії L929 в умовах холодового стресу

Abstract

Досліджено протиапоптотичну дію нейропептиду кіоторфін на моделі холодового стресу фібробластів лінії L929. Вплив дипептиду на клітини аналізували за морфологічними показниками, за допомогою цитофлуориметрії з одночасним фарбуванням annexin V/7-AAD та дослідженням виходу цитохрому с до цитоплазми клітин. У вибраних умовах холодового стресу відмічено вірогідне збільшення кількості клітин з морфологічними ознаками апоптозу за даними світлової мікроскопії, порушення асиметрії мембрани та зареєстровано появу в цитоплазмі клітин цитохрому с. Доведено, що додавання кіоторфіну в концентрації 100 мкг/л до середовища культивування за 15 хв до моделювання холодового стресу сприяло вірогідному зменшенню кількості клітин з ознаками апоптозу. Кількість annexin V⁺/7-AAD⁻-клітин після попередньої інкубації фібробластів з дипептидом знижувалась до 19,1 ± 0,5 % порівняно зі зразками після холодового стресу (55,3 ± 2,1 %), а кількість клітин, в цитоплазмі яких зареєстровано цитохром с, зменшувалася в 3,65 раза. На підставі результатів досліджень висловлено припущення, що попередня інкубація з регуляторним нейропептидом кіоторфін у концентрації 100 мкг/л ефективно запобігає апоптозу у фібробластах L929 в умовах холодового стресу.

We were study the antiapoptotic effect of the neuropeptide kyotorphin in a model of cold stress fibroblasts L929. The effect of dipeptide on cells was analyzed by morphological parameters, using cytofluorimetry with simultaneous staining of annexin V/7-AAD and study of the release of cytochrome c to the cytoplasm of cells. Under selected conditions of cold stress, there was a significantly increase in the number of cells with morphological features of apoptosis according to light microscopy, violation of membrane asymmetry, and the appearance of cytochrome c cells in the cytoplasm was registered. It has been proved that the addition of kyotorphin at a concentration of 100 μg/l to the culture medium 15 min before the modeling of cold stress significantly reduces the number of cells features of apoptosis. The number of annexin V/7-AAD⁻-cells after pre-incubation of fibroblasts with dipeptide decreased to 19.1 ± 0.5 % compared to samples after cold stress (55.3 ± 2.1 %), and the number of cells in the cytoplasm of which was registered cytochrome c, decreased by 3.65 times. Studies have suggested that pre-incubation with the regulatory neuropeptide kyotorphin at a concentration of 100 μg/l effectively prevents apoptosis in fibroblasts L929 under cold stress.