Особенности клонирования фрагментов rpoВС -оперона Escherichia coli в плазмидах pUC

Abstract

На основе плазмиды pUC19 и космиды pJC703 сконструированы рекомбинантные плазмиды со встроенным BglII-фрагментом rpoВС-оперона Е. coli, включающим полные гены rplL, rplJ и rpoВ и участки генов rplA и rpoС . Сконструированы рекомбинантная плазмида pUC18 со встроенным сильным промотором rpoBС-оперона — Pj, а также рекомбинантные плазмиды pUC18 и pUC19, включающие центральный фрагмент гена rpoВ длиной 2870 пар оснований. Определены ориентации клонированных фрагментов в рекомбинантных плазмидах. Предполагается, что определяющим ориентацию Bglll-фрагмента рJС703 при встраивании его в плазмиду pUC является его участок, содержащий сильный промотор Pj.

На основі плазміди pUC19 і косміди pJC703 сконструйовано рекомбінантні плазміди з вбудованим BglII-фрагментом rpoВС-оперона Е. coli, що включає повні гени rplL, rplJ і rpoВ і ділянки генів rplA і rpoС. Сконструйовано рекомбінантнуплазміду pUC18 з вбудованим сильним промотором rpoBС-оперона - Pj, а також рекомбінантні плазміди pUC18 і pUC19, що включають центральний фрагмент гена rpoВ довжиною 2870 пар основ. Визначено орієнтації клонованих фрагментів у рекомбінантних плазмідах. Передбачається, що орієнтацію BglII-фрагмента рJС703 при вбудовуванні його в плазміду pUC визначає його ділянка, що містить сильний промотор Pj.

Recombinant plasmids with inserted BglII E. coli rpoBC-operon fragment, including the whole rplL, rplJ and rpoB-genes and parts of rplA and rpoC-genes are constructed, plasmid pUC19 and cosmid pJC703 being the origin of them. The recombinant plasmid pUCIS with an inserted strong promoter of the rpoBC-operon — Pj as well as recombinant plasmids pUC18 and pUC19 carrying the 2870 bp central fragment of the rpoB-gene are also constructed. Orientations of the cloned fragments are determined for all the recombinant plasmids. It is supposed that strong Pj-promoter including part of the BglII pJC703 fragment determines its orientation when it is inserted into the pUC plasmid.