Створення векторів трансформації рослин для отримання стійкості до потівірусів

Abstract

Найконсервативнішими серед усіх ділянок геному потівірусів є гени НС-Рrо, СІР, NIb і СР. Порівняно нуклеотидну послідовність даних генів з-поміж 32 вірусів роду Potyvirus і відібрано ділянки, з найвищим відсотком ідентичності. Ділянки ампліфіковано з повнорозмірної кДНК вірусу мозаїки турнепсу (ВМТ) і вбудовано у висококопійний ТОРО-вектор, яким трансформовано компетентні клітини Escherichia сolі. Cтворено вектори трансформації рослин на основі комерційної плазміди рВІ121, у якій вбудовано кДНК окремо однієї (НС-Рrо, СІР, NIb або СР), двох (НС-Рrо та СІР) і трьох (НС-Рrо, СІР і NIb) консервативних ділянок генів ВМТ. Отримано трансформовані клітини Аgrobacterium tumefaciens, які несуть рВI121.

Genes HC-Pro, CIP, NIb, and CP are known to be the most conservative in genome of the potyviruses. The comparison of nucleotide sequences of these genes for 32 viruses of Potyvirus genus was carried out. The fragments with the highest percent of identity were selected, amplified from full size cDNA of Turnip mosaic virus (TuMV), and inserted into a high-copy TOPO-vector, used for the transformation of competent Escherichia coli cells. The construction of vectors for plant transformation on the basis of commercial vector pBI121 was performed. cDNA corresponding to one separate (HC-Pro, CIP, NIb or CP), two (HC-Pro and CIP), and three (HC-Pro, CIP, and NIb) conservative regions was inserted into the vector. The transformed cells of Agrobacterium tumefaciens carrying plasmids pBI121 were obtained.

Наиболее консервативными среди всех участков генома потивирусов являются гены НС-Рrо, СІР, NIb и СР. Проведено сравнение нуклеотидной последовательности данных генов у 32 вирусов рода Potyvirus и отобраны области, отличающиеся самым высоким процентом идентичности. Области амплифицировали с полноразмерной кДНК вируса мозаики турнепса (ВМТ) и встраивали в высококопийный ТОРО-вектор, которым трансформировали компетентные клетки Еscherichia colі. Сконструированы векторы трансформации растений на основе коммерческой плазмиды рВІ121, в которой встроены кДНК отдельно одного (НС-Рrо, СІР, NIb или СР), двух (НС-Рrо и СІР) и трех (НС-Рrо, СІР и NIb) консервативних участков генов ВМТ. Получены трансформированные клетки Agrobacterium tumefaciens, несущие рВІ121.