Агробактериальная трансформация салата (Lactuca sativa L.) конструкциями, несущими гены бактериальных антигенов из Mycobacterium tuberculosis

Abstract

Методом трансформации с помощью Agrobacterium tumefaciens были получены трансформированные растения Lactuca sativa с генами, кодирующими синтез туберкулезных антигенов. Исходным материалом являлись семядольные листья салата сортов Ералаш, Рубиновое кружево и Снежинка. Векторные конструкции содержали селективный ген неомицинфосфотрансферазы II nptII и целевые гены ESAT6, Ag85B (-TMD), ESAT6:Ag85B (-TMD). ПЦР-анализ геномной ДНК показал наличие как селективных, так и целевых генов во всех анализированных растениях. В то же время ПЦР-анализ обратных транскриптов выявил, что возможно как наличие, так и отсутствие транскрипции гена ESAT6 при стабильной транскрипции гена nptII.

Методом трансформації за допомогою Agrobacterium tumefaciens отримано трансформовані рослини Lactuca sativa з генами, що кодують синтез туберкульозних антигенів. Вихідним матеріалом були сім’ядольні листки салату сортів Єралаш, Рубінове мереживо та Сніжинка. Векторні конструкції мали селективний ген неоміцинфосфотрансферази II nptII та цільові гени ESAT6, Ag85B(-TMD), ESAT6:Ag85B(-TMD). ПЛР-аналіз геномної ДНК виявив наявність як селективних, так і цільових генів у всіх проаналізованих рослинах. В той же час ПЛР-аналіз зворотних транскриптів показав, що можливі як присутність, так і відсутність транскрипції гена ESAT6 при стабільній транскрипції гена nptII.

Transgenic plants of lettuce Lactuca sativa L. cv. Eralash, Sniezinka, Rubinovoje kruzevo with genes coding synthesis of tuberculosis antigenes have been obtained by Agrobacterium-mediated transformation. Cotyledons of in vitro seedlings were used as the initial material for transformation with plasmids pСB063 (genes ESAT6, nptII) and pСB064 (genes ESAT6:Ag85B(-TMD), nptII). PCR-analysis has shown the presence both selective and target genes in all plants analyzed. At the same time, the RT-PCR has shown that both the presence and the absence of a transcription of gene ESAT6 at a stable transcription of a gene nptII is possible.