Коррекция ДНК-полимеразных ошибок и 3' → 5'-экзонуклеазы печени крысы

Abstract

Одним из уровней исправления ДНК-полимеразных ошибок является 3'→5'-экзонуклеазная «редакторская» активность, отсутствующая или неэффективная у ДНК-полимераз млекопитающих. Предполагается, что клетки могут содержать корректирующую 3'→5'-экзонуклеазу, не связанную ковалентно с ДНК-полимеразами. Из печени крысы выделены и охарактеризованы три различные 3'→5'-экзонуклеазы. Для изучения корректорской способности этих ферментов к 3'-концам поли[д(А-Т)] присоединяли правильные или ошибочные ³Н-дНМФ с помощью ДНК-полимеразы β или концевой трансферазы. Качество полученных матриц контролировали, измеряя коррекционную специфичность ДНК-полимеразы фага Т4. Установлено, что при регенерации печени появляется 3'→5'-экзонуклеаза, способная к преимущественному удалению некомплементарных нуклеотидов из ДНК-затравки.

One of the levels of correcting the DNA polymerase mistakes is the 3'→5'-exonuclease «proofreading» activity being absent or non-effective for mammalian DNA polymerases. Cells are supposed to contain correcting 3'→5'-exonuclease non-bound covalently with DNA polymerases. Three 3'→5'-exonucleases are isolated from the rat liver. To study their correcting ability both correct and incorrect [³H] dNMPs are attached to 3'-ends of poly[d(A-T)] by means of DNA polymerase β or terminal transferase. The quality of templates obtained is checked by the measurement of correction specificity of the phage T4 DNA polymerase. 3'→5'-exonuclease, mainly able of removing non-complementary nucleotides from the DNA primer is established to arise under the liver regeneration.

Одним із рівнів виправлення ДНК-полімеразних помилок є 3'→ 5'-екзонуклеазна «редакторська» активність, відсутня або неефективна у ДНК-полімерази ссавців. Передбачається, що клітини можуть містити коригувальну 3 '→5'-екзонуклеазу, не зв’язану ковалентно з ДНК-полімеразами. З печінки щура виділено і охарактеризовано три різні 3'→ 5'-екзонуклеази. Для вивчення коректорській здатності цих ферментів до 3'-кінців полі [д (А–Т)] приєднували правильні або помилкові ³Н-дНМФ за допомогою ДНК-полімерази ? або кінцевої трансферази. Якість одержаних матриць контролювали, вимірюючи корекційну специфічність ДНК-полімерази фага Т4. Встановлено, що при регенерації печінки з’являється 3'→ 5'-екзонуклеаза, здатна до переважного видаленню некомплементарних нуклеотидів з ДНК-затравки.