Продукція трансформуючого фактора росту α, вміст рецептора епідермального фактора росту та експресія трансформованого фенотипу в клітинах лінії НЕр-2 карциноми людини, трансфікованих геном HIV-1 tat

Abstract

Вивчали активність трансформуючого фактора росту альфа (ТФР-α) у безсироватковому середовищі, яке кондиціонували клонами карциномних клітин НЕр-2, отриманими шляхом їх трансфекції регуляторним геном tat вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ-1). У клітинах одержаних клонів аналізували також рівень рецептора епідермального фактора росту (ЕФР)/ТФР-α і експресію трансформованого фенотипу (за інтенсивністю утворення клітинами колоній у середовищі, яке містить 0,33 % агару). Показано, що клітини клону A5st секретують стимулю­ючі ріст фактори, активність яких пригнічується моноіаіональними антитілами проти ТФР-α. Клітини всіх досліджуваних клонів експресу ють приблизно однаковий рівень рецептора ЕФР/ТФР-α, що підтверджується двома різними методами – проточною цитофлюориметрією і радіорецепторним аналізом. ЕФР не впливав на експресію трансформованого фенотипу у клітинах клону A5st, які продукували ТФР-α. Разом з тим в інших клонах клітин НЕр-2 ЕФР індукував експресію трансформованого фенотипу. Таким чином, стабільна експресія регуляторного гена tat ВІЛ-1 індукує продукцію ТФР-α, який бере участь у клітинній трансформації, що може підвищувати ризик розвитку онкологічних захворювань у ВІЛ-інфікованих хворих.

Изучали активность трансформирующего фактора роста аль­фа (ТФР-α) в бессывороточной среде, кондиционированной клонами карциномных клеток НЕр-2, полученными путем их трансфекции регуляторным геном tat вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1). В клетках полученных клонов анализирова­ли также уровень рецептора эпидермального фактора роста (ЭФР)/ТФР-α и экспрессию трансформированного фенотипа (по интенсивности образования клетками колоний в среде, содержащей 0,33 % агара). Показано, что клетки клона A5st секретируют стимулирующие рост факторы, активность которых ингибируется моноклинальными антителами против ТФР-α. Клетки всех исследуемых клонов экспрессируют примерно одинаковый уровень рецептора ЭФР/ТФР-α, что подтверждается двумя различными методами – проточной цитофлюориметрией и радиорецепторным анализом. ЭФР не оказывал влияния на экспрессию трансформированного фенотипа в клетках клона A5st, продуцирующих ТФР-α. Вместе с тем в других клонах клеток НЕр-2 ЭФР индуцировал экспрес­сию трансформированного фенотипа. Таким образом, ста­бильная экспрессия регуляторного гена tat ВИЧ-l индуцирует продукцию ТФР-α, участвующего в клеточной трансформа­ции, что может повышать риск развития онкологических заболеваний у ВИЧ-инфицированных больных.

Several clones of HEp-2 human carcinoma cells transfected with HIV-1 lot regulatory gene were studied for the presence of transforming growth factor a (TGF-α) activity in the serum-free culture medium conditioned by these cells, the level of epidermal growth factor (EGF)lTGF-α receptors and the expression of transformed phenotype. Clone A5st was shown to secrete growth stimulating factors whose activity was inhibited by the monoclonal antibody against TGF-α. The cells of alt studied clones possessed the same level of EGF/ TGF-α receptors measured by two different, methods – indirect flow cytometry and radioreceptor analysis. The expression of transformed phenotype (estimated on the basis of intensity of colonyforming by the cells cultured in the medium supplemented with 0.33 % agar) did not change under the effect of EGF in A5st clone producing TGF-α immunoreactive factors. But this expression was induced in the other studied clones of HEp-2 cells. Thus, the expression of HIV-1 tat regulatory gene can induce cellular production of TGF-α which participates in the cell transformation and in this way increases the risk of development of oncological diseases in AIDS patients.