Отримання та ампліфікація кДНК консервативної ділянки гена 8H07 нематоди Heterodera shcachtii з високою спорідненістю до його гомолога у ріпака

Abstract

Розроблено оригінальний метод виділення з клітин рослин малих регуляторних РНК (si/miRNA). За допомогою ПЛР проведено полімеразне копіювання фрагмента кДНК гена 8H07 нематоди Heterodera schachtii. Шляхом гібридизації si/miRNA рослин з фрагментом кДНК консервативної ділянки у гена 8H07 нематоди підтверджено високий ступінь їхньої гомології. В подальшому ампліфікований кДНК фрагмент гена 8H07 нематоди буде використано для створення рекомбінантного гена з антисенсовою послідовністю dsRNA для підвищення стійкості рослин ріпака до паразитичної нематоди.

Разработан оригинальный метод выделения из клеток растений малых регуляторных РНК (si/miRNA). С помощью ПЦР осуществлено полимеразное копирование фрагмента кДНК гена 8H07 Heterodera schachtii. Путем гибридизации si/miRNA растений с фрагментом кДНК консервативного участка гена 8H07 нематоды подтверждена их высокая степень гомологии. В дальнейшем амплифицированный кДНК фрагмент гена 8H07 нематоды будет использован для создания рекомбинантного гена с антисенсовой последовательностью dsRNA для повышения устойчивости растений рапса к паразитической нематоде.

Original method of small regulatory si/miRNA isolation from plant cells was elaborated. PCR amplification of fragment cDNA 8H07 nematode Heterodera schachtii gene was carried out. Using Northernblot method hybridization of plant si/miRNA with cDNA fragment of conservative region 8H07 gene the presence of their high homology is found out. The amplified cDNA fragment of nematode 8H07 gene in future will be used for creation recombinant gene with complementary antisense dsRNA sequence for increasing resistance of rape plants to parasitic nematodes.