Локализация антигенных детерминант бычьей триптофанил-тРНК-синтетазы, узнаваемых моноклональными антителами

Abstract

Используя ограниченное расщепление бычьей триптофанил-тРНК-синтетазы трипсином и BrCN, а также радиоиммуноадсорбцию и радиоиммуноблотинг, показано, что антигенная детерминанта для моноклональных антител Ам1 расположена на фрагменте с молекулярной массой 5000, а для АмЗ–9000 на N-конце молекулы синтетазы. Антигенная детерминанта для Ам2 находится внутри фрагмента 24 000, расположенного в середине полипептидной цепи молекулы фермента. После исчерпывающего расщепления под действием BrCN антигенная детерминанта сохраняется только для Ам1. С помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии выделен этот BrCN-фрагмент, содержащий 22–25 аминокислотных остатков. Триптические пептиды, а также пептиды, полученные расщеплением по остаткам аргинина, были антигенно неактивны для всех трех исследуемых моноклональных антител.

Використовуючи обмежене розщеплення бичачої триптофаніл-тРНК-синтетази трипсином і BrCN, а також радіоімуноадсорбцію і радіоімуноблотинг, показано, що антигенна детермінанта для моноклональних антитіл АМ1 розташована на фрагменті з молекулярною масою 5000, а для АМЗ – 9000 на N-кінці молекули синтетази. Антигенна детермінанта для АМ2 знаходиться всередині фрагмента 24000, розташованого в середині поліпептидного ланцюга молекули ферменту. Після вичерпного розщеплення під дією BrCN антигенна детермінанта зберігається тільки для АМ1. Методом високоефективної рідинної хроматографії виділено цей BrCN-фрагмент, що містить 22–25 амінокислотних залишків. Триптичні пептиди, а також пептиди, отримані розщепленням за залишками аргініну, були антигенно неактивними для всіх трьох досліджуваних моноклональних антитіл.

The method of limited cleavage of tryptophanyl-tRNA synthetase with trypsin and BrCN as well as radioimmunoassay and radioimmunoblotting are used to show that the antigenic determinant for monoclonal antibodies Ami is located within the 5 kDa fragment and for the Am3 – within the 9 kDa fragment, the both are located at the N-termini of the polypeptide chains; the antigenic determinant for Am2 residues is within the 24 kDa fragment located in the middle of tryptophanyl-tRNA synthetase polypeptide chain. BrCN-fragment maintaining the Ami antigenic determinant is purified by HPLC; it contains 22–25 amino acid residues. Tryptic fragments and fragments obtained by cleavage only at arginine residues are immunologically inactive against Ami, Am2 and Am3.