Получение рекомбинантного шаперона GroEL и его иммунологическая кросс-реактивность с Hsp60

Abstract

Описан метод получения рекомбинантного шаперона GroEL (прокариотного гомолога эукариотного шаперона Hsp60), включающий экспрессию белка в клетках Escherichia coli с последующей очисткой белка градиентным высаливанием из лизата клеток-продуцентов, гель-фильтрацией на сефакриле-8300 и ионообменной хроматографией на MonoQ HR 5/5. Данный метод позволяет эффективно наработать белок GroEL 95 %-й степени очистки в препаративных количествах. Рекомбинантный белок затем использовали для получения поликлональных анти-GroEL антител и синтеза аффинной колонки. Показан иммунологический перекрест аффинно очищенных поликло­нальных анти-GroEL антител с представителями семейства Hsp60 в лизатах органов и клеток различных видов млекопитающих — от мыши до человека, что позволяет использовать данные антитела при изучении изменения уровней экспрессии и клеточной локализации Hsp60 в случае аутоиммунных и раковых патологий человека

Описано метод одержання і очищення рекомбінантного шапе­рону GroEL (прокаріотного гомолога еукаріотного шаперону Hsp60), що включає експресію білка в клітинах Escherichia coli з наступним градієнтним висолюванням з лізату клітин-продуцентів, гель-фільтрацією на сефакрилі-SZQO та іонообмін­ною хроматографією на MonoQ HR 5/5. Такий метод дозво­лив ефективно напрацювати білок GroEL у препаративних кількостях, який потім використовували для отримання анmu-GroEL антитіл і синтезу афінної колонки. Показано імуно­ логічний перехрест афінно очищених поліклональних анти-GroEL антитіл з білком родини Hsp60 у лізатах органів і клітин різних видів ссавців — від миші до людини, що дозволяє використовувати ці антитіла при вивченні змін рівня експ­ресії і клітинної локалізації Hsp60 в разі аутоімунних і ракових патологій людини.

The method of obtaining and purification of recombinant chaperon GroEL (prokaryotic homolog of eukaryotic chaperon Hsp60) including the protein expression in E. coli cells, precipitation with saturated ammonium sulphate from a producent lysate, gel-filtration on Sephacryl-300 column and ion-exchange chromatography on MonoQ HR 5/5 column, is described. The present method allows effective obtaining of the preparative amount of the GroEL protein of 95 % purity. The recombinant protein was used for the anti-GroEL antibodies production and synthesis of the affine column. The immunological cross-reactivity of polyclonal affinepurified anti-GroEL antibodies and members of Hsp60 family from different organs and cells lysates of different mammals, from mouse to human, have been revealed, which allows using these antibodies for research of Hsp60 expression alterations and cell localization at human autoimmune and cancer pathologies.