Surface-exposed actin binds plasminogen on the membrane of agonist-activated platelets: a flow cytometry study

Abstract

Aim. To elucidate whether actin exposed on the surface of agonist-activated platelets is responsible for plasminogen binding. Methods. Human washed platelets were obtained by gel-filtration on Sepharose-2B. The levels of exposed actin on the outer surface of plasma membrane of intact and thrombin- or collagen-stimulated platelets were monitored by flow cytometry. The binding of plasminogen fluorescent conjugate (Pg-FITC) with platelets treated with anti-actin antibody or non-immune IgG (control) was analyzed cytometrically. Results. Thrombin or collagen exposure resulted in the dose-dependent actin expression on the surface of stimulated platelets. Pre-treatment of stimulated platelets with specific anti-actin antibodies was shown to significantly prevent the binding of Pg-FITC with the platelet surface. Conclusion. The results of the present study indicate that actin exposed on the platelet surface at the agonist-induced activation is involved in the plasminogen binding.

Мета. З’ясувати здатність актину, що експонується на поверхні тромбоцитів, активованих різними агоністами, зв’язувати плазміноген. Методи. Відмиті тромбоцити людини отримували за допомогою гель-фільтрації на Сефарозі-2В. Кількісну оцінку експонування актину на зовнішній поверхні інтактних тромбоцитів та тромбоцитів, активованих тромбіном або колагеном, проводили із застосуванням протокової цитометрії. Зв’язування флуоресцентного кон’югату плазміноген-FITC (Pg-FITC) з тромбоцитами, обробленими антитілами проти актину або неімунними IgG (контроль), аналізували цитометрично. Результати. Вплив тромбіну та колагену призводить до появи на зовнішньому боці плазматичної мембрани тромбоцитів актину, кількість якого залежала від концентрації агоністів. Попередня обробка активованих тромбоцитів специфічними антитілами проти актину значно запобігала зв’язуванню Pg-FITC з поверхнею тромбоцитів. Висновки. Результати представленого дослідження вказують на залучення експонованого актину до зв’язування плазміногену на поверхні тромбоцитів, стимульованими різними агоністами.

Цель. Выяснить способность актина, который экспонируется на поверхности тромбоцитов, активированных раз-личными агонистами, связывать плазминоген. Методы. Отмытые тромбоциты человека получали с помощью гель-фильтрации на Сефарозе-2В. Количественную оценку экспонирования актина на внешней поверхности интактных тромбоцитов и тромбоцитов, активированных тромбином или коллагеном, проводили с использованием про-точной цитометрии. Связывание флуоресцентного конъюгата плазминоген-FITC (Pg-FITC) с тромбоцитами, обра-ботанными антителами против актина или неимунными IgG (контроль), анализировали цитометрически. Результаты. Влияние тромбина и коллагена приводило к появлению на внешней стороне плазматической мембраны тромбоцитов актина, количество которого зависело от концентрации агонистов. Предварительная обработка активированных тромбоцитов специфическими антителами против актина в значительной степени предотвращала связывание Pg-FITC с поверхностью тромбоцитов. Выводы. Результаты представленного исследования указывают на вовлечение экспонированного актина в связывание плазминогена на поверхности тромбоцитов, стимулированных различными агонистами.