Исследование сополимеров фибриногена с N-концевым дисульфидным узлом фибрина методом трансмиссионной электронной микроскопии

Abstract

Методом трансмиссионной электронной микроскопии негативно контрастированных образцов исследована структура сополимеров фибриногена (F) с N-концевым дисульфидным узлом дез-А ABB-фибрина (tN-ДСУ). Показано, что первичным продуктом сополимеризации является нить из молекул фибриногена, расположенных по типу конец-к-концу. Молекулы tN-ДСУ, связывающие между собой молекулы фибриногена, на электронное рам мах не просматриваются ввиду, как мы полагаем, их малого размера и отсутствия глобулярной структуры. Образующиеся однонитчатые сополимеры латерально агрегируют в фибриллы различной толщины, создающие трехмерную фибриллярную сеть. Полученные данные подтверждают ранее предложенную гипотезу о струк­турной основе F-tN-ДСУ сополимера как нити расположенных конец-к-концу молекул фибриногена, соседние Д-домены которых связаны молекулами tN-ДСУ по центрам полимеризации фибрина а-А и b-В. Показанный нами многостадийный процесс сборки сополимера подобен таковому полимери­зации фибрина, что свидетельствует о лежащем в их основе едином механизме самосборки путем связывания друг с другом комплементарных центров полимеризации фибрина.

Методом трансмісійної електронної мікроскопії негативно контрактованих зразків досліджено структуру сополімерів фібриногена (F) з N-кінцевим дисульфідним вузлом дезААВВ-фібрину (tN-ДСВ). Показано, що первинним продуктом сополімериза ції є нитка з молекул фібриногена, розміщених по типу кінець-до-кінця. Молекули tN-ДСВ, які зв'язують між собою молекули фібриногена, на електронограмах не виявля­ються через, як ми вважаємо, їх малий розмір та відсутність глобулярної структури. Утворювані однониткові сополімери латерально агрегують у фібрили різної товщини, иуо створю­ють трьохмірну фібрилярну сітку. Отримані дані підтвер­джують раніше запропоновану гіпотезу стосовно структурної основи F-tN-ДСВ сополімеру як нитки розташованих кінець-дo-кінця молекул фібриногена, сусідні Д-домени яких зв'язані молекулами tN-ДСВ по центрах полімеризації фібрину а-А і b-В. Показаний нами багатостадійний процес складання со­полімеру подібний до такого полімеризації фібрину, що свід­чить про єдність їх механізмів самоскладання шляхом зв'я­зування одне з одним, комплементарних центрів полімеризації фібрину

The structure of co-polymers of fibrinogen (F) with N-terminal disulfide knot of desAABB fibrin (tN-DSK) was investigated by transmission electron microscopy of their negatively contrasted samples. It was shown that the co-polymers initial forms were represented by short threads of 2–4 end-to-end arranged F molecules, in which tN-DSK molecules could't be visualized by the used method. Then long single-threaded structures formed which aggregated laterally in fibril-like bunches of varying thickness. The network of fibrils have arisen finally. In control experiments when in the fibrinogen containing samples tN-DSK was substituted for thrombin, one could observe the double-threaded twisted protofibrils but not any of the single-threaded end-to-end arranged molecules. These studies confirm the hypothetical model of F-tN-DSK co-polymer structure as the thread of end-to-end arranged fibrinogen molecules, the adjacent D-domain of which are bound by tN-DSK molecules via the fibrin polymerization sites. The lateral aggregation of co-polymer strains into fibrils and fibril network formation revealed in this study is the evidence of similarity between F-tN-DSK co-polymers and. fibrin polymer structures. It is not wonder because both structures are formed by the unique self-assembly mechanism in which the noncovalent binding of fibrin(ogen) molecules by the complementary fibrin polymerization sites is involved.