Модельная система in vitro для изучения репарации двунитчатых разрывов ДНК экстрактами из высших растений

Abstract

Предложена модельная система in vitro для изучения репарации двухцепочечных разрывов в ДНК с участием белковых экстрактов из высших растений. Система основана на исследовании возможности гомологической рекомбинации между двумя линейными фрагментами ДНК плазмиды pUC19. Результатом протекания процесса рекомбинации является восстановление структурной целостности гена IacZ плазмиды pUC19 и как следствие – голубой окраски рекомбинантов, растущих на среде с ИПТГ u Z-gal. Двухцепочечный разрыв в плазмидной ДНК моделировался с помощью рестриктаз EcoRI и BglI. Обсуждаются также возможные варианты репарации в данной системе лигированием субстратов или их негомологической рекомбинацией.

Запропоновано модельну систему in vitro для вивчення репарації дволанцюгових розривів у ДНК за участю білкових екстрактів із вищих рослин. Система базується на дослідженні можливості гомологічної рекомбінації між двома лінійними фрагментами Д НК плазміди pUC19. Результатом проходження процесу рекомбінації є відновлення структурної цілісності гену IacZ плазміди pUC19 і як наслідок–блакитного забарвлення рекомбінантів, що ростуть в присутності ІПТГ та Z-gal. Дволанцюговий розрив у плазмідній ДНК моделювався за допомогою рестриктаз EcoRI і BglI. Обговорюються також можливі варіанти репарації в даній системі лігіюванням субстратів чи їх негомологічною рекомбінацією.

It has been established the in vitro model system for investigation of DNA double stranded breaks (dsb ) reparation based on using of higher plants protein extracts. The system is based on searching of possibility of homologous recombination between two linear pUC19 DNA fragments. As a result of recombination processes gene lacZ is restored in their structure and recombinants with blue phenotype appear on the media with IPTG and Z-gal. Dsb in plasmid DNA has been provoked using EcoRI and Bgll restriction enzymes. The possibility versions of recombination in proposed system by means of substrate ligation and nonhomologous recombination is disscused.