Влияние криоконсервирования на жизнеспособность, иммунофенотип и дифференцировочные свойства мезенхимальных стромальных клеток ранних стадий органогенеза

Abstract

Исследовали влияние криоконсервирования путем медленного программного замораживания на жизнеспособность, иммунофенотип и дифференцировочные свойства мезенхимальных стромальных клеток (МСК) человека ранних стадий органогенеза. Показано, что после криоконсервирования под защитой 10%-го диметилсульфоксида (ДМСО), включающего замораживание со скоростью 1°С/мин до –80°С с последующим погружением в жидкий азот, сохранность клеток, оцененная по окрашиванию трипановым синим, составляла 88,4 ± 1,7%. Метаболическая активность клеток, оцененная по восстановлению Alamar Blue, снижалась после криоконсервирования на 15%. Иммунофенотипический анализ МСК 4–12-го пассажей показал, что 95% клеток как до, так и после криоконсервирования экспрессировали маркеры CD29, CD44, CD73 и CD105. Содержание клеток, негативных по маркерам CD34, CD38, CD45, составляло более 95%. После криоконсервирования МСК сохраняют способность к индуцированной дифференцировке в остеогенном и адипогенном направлениях. Установлено, что медленное замораживание МСК под защитой ДМСО оказывает стимулирующее действие на дифференцировку клеток.

Досліджували вплив кріоконсервування шляхом повільного програмного заморожування на життєздатність, імунофенотип і диференціювальні властивості мезенхімальних стромальних клітин (МСК) ранніх стадій органогенезу. Показано, що після кріоконсервування під захистом 10%-го диметилсульфоксиду (ДМСО) зі швидкістю заморожування 1°С/хв до –80°С з подальшим зануренням у рідкий азот, збереженість клітин за забарвленням трипановим синім складала 88,4 ± 1,7 %. Метаболічна активність клітин за відновленням Alamar Blue знижувалась після кріоконсервування на 15%. Імунофенотипічний аналіз МСК 4–12-го пасажів показав, що 95% клітин до і після кріоконсервування експресували маркери CD29, CD44, CD73, CD105. Вміст клітин, негативних за маркерами CD34, CD38, CD45, складав понад 95%. Після кріоконсервування МСК зберігають здатність до індукованого диференціювання в остеогенному та адипогенному напрямках. Встановлено, що повільне заморожування МСК під захистом ДМСО стимулює диференціювання клітин.

The effect of cryopreservation by slow program cooling on the viability, immunophenotypic and differentiative properties of mesenchymal stromal cells (MSCs) of early organogenesis stage was studied. It was shown that after cryopreservation under the protection of 10% dimethyl sulfoxide (Me2SO) at the cooling rate of 1°C/min down to –80°C with the following plunging into liquid nitrogen the cell viability assessed by trypan blue staining was 88.4 ± 1.7%. The metabolic activity of cells assessed by Alamar Blue reduction assay decreased after cryopreservation by 15%. Immunophenotypic analysis of MSCs after 4–12 passages showed that 95% of cells expressed the markers CD29, CD44, CD73, CD105 prior to and after cryopreservation. The number of CD34–, CD38– and CD45– cells was more than 95%. After cryopreservation MSCs maintained their capacity for induced differentiation into osteogenic and adipogenic directions. Slow cooling with Me2SO as cryoprotectant was observed to stimulate differentiation of MSCs.