Экспрессия двух вариантов гена кор-антигена вируса гепатита у человека в Escherichia coli

Abstract

Сконструированы плазмиды для прямой экспрессии в клетках Escherichia coli двух вариантов гена кор-антигена вируса гепатита В человека, отличающихся структурой 5-концевой части, под контролем промотора триптофанового оперона. Последовательность Шайна-Далгарно гена trpL в этих плазмидах сближена с инициирующими кодонамн АТG - либо первым, либо вторым – в открытой фазе трансляции С, отвечающей гену корантигена. В сопряженной бесклеточной системе биосинтеза белка показан эффективный синтез полипептидов с молекулярными массами 24000 и 21000 в результате экспрессии длинного и короткого вариантов гена соответственно. Синтез иммунологически активного кор-антигена происходит в бактериальных клетках in vivo. С помощью конкурентной радиоиммунопреципитации проведена ориентировочная оценка выхода обоих вариантов кор-антигена в клетках Е. coli.

Сконструйовано плазміди для прямої експресії в клітинах Escherichia coli двох варіантів гена кор-антигену вірусу гепатиту В людини, які відрізняються структурою 5-кінцевої частини, під контролем промотору триптофанового оперона. Послідовність Шайна-Далгарно гена trpL у цих плазмідах зближена з ініціювальними кодонами АТG –або першим, або другим – у відкритій фазі трансляції С, що відповідає гену кор-антигену. У спряженій безклітинній системі біосинтезу білка показано ефективний синтез поліпептидів з молекулярними масами 24000 і 21000 в результаті експресії довгого і короткого варіантів гена відповідно. Синтез імунологічно активного кор-антигену відбувається в бактерійних клітинах in vivo. За допомогою конкурентної радіоімунопреціпітації проведено орієнтовну оцінку виходу обох варіантів кор-антигену в клітинах Е. coli.

The plasmids for direct expression of human hepatitis B core antigen (HBcAg) gene in E. coli cells controlled by trp promoter are constructed. They differ in the 5'-terminal part of HBcAg gene. First or second initiated ATG-codons located in the open reading frame C are close to the Shine-Dalgarno sequence of trpL gene. An effective synthesis of poly-peptides with molecular weights 24 and 21 kD evoked by the expression of long and short variants of HBcAg gene, respectively, are shown in vitro, using the E. coli coupled transcription-translation cell-free system. The synthesis of immunologically active HBcAg occurs in bacterial cells in vivo. The approximate yields of both HBcAg variants are estimated by the competitive radioimmunoprecipitation assay.