Присутствие двух сильных промоторов определяет ориентацию фрагмента ДНК при встраивании в плазмиду pUC19

Abstract

Сконструированы рекомбинантные плазмиды pUC19/rpoB, содержащие и не содержащие промотор Рj. Показано, что стабильность обеих плазмид равна 100%. В полученных рекомбинантных плазмидах, содержащих промотор Рj, встроенный BglII-фрагмент ориентирован одинаково: таким образом, что транскрипция с промоторов lacUV5 и Рj инициируется во встречном направлении. Удаление промотора Рj делает возможной противоположную ориентацию гена rpoB в рекомбинантных плазмидах.

Сконструйовано рекомбінантні плазміди pUC19/rpoB, які містять і не містять промотор Рj. Показано, що стабільність обох плазмід дорівнює 100 %. В отриманих рекомбінантних плазмідах, шо містять промотор Рj, вбудований BglII-фрагмент орієнтований однаково: таким чином, встановлено, що транскрипція з промоторів lacUV5 і Рj ініціюється в зустрічному напрямку. Видалення промотора Рj робить можливою протилежну орієнтацію гена rpoB у рекомбінантних плазмідах.

Recombinant plasmids pUC19/rpoB with and without the Pj promoter were constructed. For both plasmids stability was of 100 %. In obtained recombinant plasmids containing the Pj promoter the inserted Bglll fragment was oriented identically and in such a way that transcription from the lacUVS and Pj promoters was initiated in counter direction. Removal of the Pj promoter made the opposite orientation of the rpoB gene in recombinant plasmids possible.