Отбор чувствительных к бактериофагу λ клонов из устойчивого к нему штамма Escherichia coli

Abstract

A method of selection of the phage λ sensitive clones from the population of the bacteriophage λ resistant cells using the phage λcI857ApRTcR has been theoretically formulated and experimentally approved. The isolation was realized as follows. The phage λ resistant E. coli strain was infected by phage λ, which introduces antibiotic-resistance markers into the cell. The sensitive to phage λ vir and lysing at 43 °C clones were isolated on the selective medium. The frequency of occurrence of such cells in the population was 10⁻⁶ . The presence of ts-mutation in the phage cI gene has allowed to cure the cells from phage λcI857ApRTcR during cultivation of these cells under non-selective conditions at increased temperature and to obtain the phage A sensitive clones originated from resistant E. coli strain. The method can also be used for the estimation of the E. coli populations heterogeneity by a given feature.

Теоретично сформульовано та експериментально апробовано метод селекції чутливих до фага λ клонів із популяції кліринстійких до бактеріофага λ, за допомогою фага λcI857ApRTcR . Стійкий до фага λ штам Е. coli інфікували фагом λ, який привносить у клітину маркери антибіотикостійкості. На селективному середовищі було відібрано клони, чутливі до фага λ vir, які лізують при температурі 43 °C. Частота виникнення таких клітин у популяції складає 10⁻⁶ . Наявність ts-мутації в сI-гені фага дозволила при вирощуванні у неселективних умовах і при підвищеній температурі які несуть цей фаг, вилікувати клітини від фага λcI857ApRTcR та одержати чутливі до фага λ клони, що походять від вихідного нечутливого штаму Е. coli. Метод також може бути викори­станий для популяційних оцінок гетерогенності популяцій λ за даною ознакою.

Теоретически сформулирован и экспериментально апробирован метод селекции чувствительных к фагу λ клонов из популяции клеток, устойчивых к бактериофагу λ с помощью фага λcI857ApRTcR Устойчивый к фагу λ штамм Е. coli инфицировали фагом λ, который привносит в клетку маркеры антибиотикоустойчивости. На селективной среде отобраны клоны, чувствительные к фагу λ vir и лизирующие при температуре 43 °С. Частота возникновения таких клеток в популяции составила 10⁻⁶. Наличие ts-мутации в cI-гене фага позволило при выращивании несущих его клеток в неселективных условиях при повышенной температуре излечить клетки от фага λcI857ApRTcR и получить чувствительные к фагу λ клоны, производные исходного нечувствительного штамма Е. coli Метод также может быть использован для популяционных оценок гетерогенности популяций Е. coli по данному признаку.