АТР-независимая ДНК-топоизомераза из хлоропластов Nicotiana chinensis

Abstract

АТР-независимая ДНК-топоизомераза выделена из очищенных хлоропластов листьев Nicotiana chinensis и частично очищена хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе. Релаксация отрицательно суперспирализованной ДНК плазмиды pUR222 ферментом абсолютно зависит от присутствия ионов магния и подавляется ЭДТА, однако толерантна к присутствию спермидина (1,8 мМ), новобиоцина (80 мкг/мл) и бромистого этидия (0,8 мкг/мл). Сильная зависимость активности хлоропластной ДНК-топоизомеразы от ионов магния в АТР-независимой реакции сближает ее с бактериальными ДНК-топоизомеразами.

АТР-незалежну ДНК-топоізомеразу виділено з очищених хлоропластів листя Nicotiana chinensis і частково очищено хроматографією на ДЕАЕ-целюлозі. Релаксація негативно суперспіралізованої ДНК плазміди pUR222 ферментом абсолютно залежить від присутності іонів магнію і пригнічується ЕДТА, однак толерантна до присутності спермідину (1,8 мМ), новобіоцину (80 мкг/мл) і бромистого етидію (0,8 мкг/мл). Сильна залежність активності хлоропластної ДНК-топоізомерази від іонів магнію в АТР-незалежній реакції зближує її з бактерійними ДНК-топоізомеразами.

ATP-independent DNA topoisomerase was extracted from the purified leaf chloroplasts of Nicotiana chinensis and partially purified by the salt gradient elution from DEAE-cellulose. Relaxation of negatively supercoiled plasmid pUR222 by the enzyme was found to be absolutely dependent on the presence of magnesium ions, being completely inhibited by EDTA. DNA topoisomerase activity was tolerant to the spermidine (1.8 μg/ml), novobiocin (80 μg/ml) and ethidium bromide (0.8 ng/ml). Strong magnesium requirement of chloroplast DNA topoisomerase in ATP-independent reaction resembles properties of the prokaryotic counterparts.