Клонирование последовательностей ДНК генома кукурузы, способных к автономной репликации в Saccharomyces cerevisiae

Abstract

Фрагменты ДНК генома кукурузы, функционирующие как автономно реплицирующиеся последовательности (ARS) в дрожжах, были встроены по EcoRI-сайту плазмиды pYF40, содержащей маркерный ген His3 дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Отобраны две плазмиды со вставками, которые трансформировали штамм His ⁻ S. cerevisiae LL-20 (Leu2-3Leu2-112His3-l IHis3-15) к His⁺ с частотой (1–3) ·10² трансформантов на 1 мкг плазмидной ДНК. ARS-плазмиды находятся в клетках дрожжей в неинтегрированной форме, что подтверждается выделением из них плазмидной ДНК, которой трансформируются клетки как Е. coli, так и S. cerevisiae. Молекулярная масса клонированных EcoRI-фрагментов ДНК около 800 000.

Фрагменти ДНК генома кукурудзи, що функціонують як автономно реплікується послідовності (ARS) в дріжджах, були вбудовані по EcoRI-сайта плазміди pYF40, що містить маркерний ген His3 дріжджів Saccharomyces cerevisiae. Відібрано дві плазміди зі вставками, які трансформували штам His ⁻ S. cerevisiae LL-20 (Leu2-3Leu2-11His3-11His3-15) до His⁺ з частотою (1–3)·10² трансформантів на 1 мкг плазмідної ДНК. ARS-плазміди знаходяться в клітинах дріжджів у неінтегрованій формі, що підтверджується виділенням з них плазмідної ДНК, якою трансформуються клітини як Е. coli, так і S. cerevisiae. Молекулярна маса клонованих EcoRI-фрагментів ДНК приблизно 800000.

DNA fragments of maize genome functioning as autonomously replicating sequences (ARS) in yeast were inserted into EcoRI-site of plasmid pYF40 bearing the His3 marker of yeast Saccharomyces cerevisiae. Two plasmids with inserts were selected which transformed strain His⁻S. cerevisiae LL20(leu2-3leu2-llhis3-llhis3-15) into His⁺ with a frequency of (1-3)·10² transformants per 1 u.g of plasmid DNA. ARS-plasmids are located in yeast cells in a nonintegrated form, that is confirmed by the isolation of plasmid DNA from them, with which both E. coli and S. cerevisiae cells are transformed. Size of cloned EcoRI DNA fragments is about 0.8 MD.